폴리아크릴아미드 겔 전기영동(PAGE) 생산 공정은 주로 겔 준비, 전기영동 작업, 염색 및 결과 관찰 등의 단계로 구성됩니다.
겔 준비 분리겔(10%) 준비 : ddH2O 0 ml, 30% stock gel 3 mL, 5 mol/L Tris-HCl 5 mL, 10% SDS 1 mL, 10% AP 1 mL를 섞고 TEMED 10 μL를 넣어 바닥을 밀봉한 후 TEMED 4 μL를 넣고 잘 섞는다. 이 혼합물을 유리판 사이에 붓고 윗부분을 물로 밀봉한 후 젤이 완전히 중합될 때까지 30~60분 동안 기다립니다.
스태킹 젤(4%) 준비: ddH2O 4ml, 30% 스톡 젤 33ml, 1mol/L Tris-HCl 25mL, 10% SDS 0.2ml 및 10% AP 0.2ml를 혼합하고 TEMED 2μL를 첨가하고 즉시 잘 섞습니다. 분리 젤에 물을 붓고 이 혼합물을 추가한 다음 즉시 유리판 사이에 빗을 삽입하고 스태킹 젤이 완전히 중합될 때까지 15~30분 동안 기다립니다.
전기영동 조작 시료 처리 : 시료를 동량의 2XSDS 로딩 버퍼와 혼합하고 100도에서 3{6}}5분 동안 가열한 후 12,000rpm에서 1분간 원심분리하고 상층액을 채취하여 SDS-PAGE 분석을 수행합니다.
로딩: 유도된 샘플과 유도되지 않은 샘플 10μL를 채취하여 샘플 풀에 추가하고, 대조군으로 저분자량 단백질 표준품 20μL를 추가합니다.
전기영동: 전기영동 탱크에 1X 전기영동 버퍼를 넣고 전원을 연결한 후 스태킹 젤의 전압을 60V, 분리 젤의 전압을 100V로 유지합니다. 브로모페놀블루가 전기영동조 바닥에 도달하면 전기영동을 중단합니다(약 3시간).
염색 및 결과 관찰
염색: 유리판에서 젤을 제거하고 Coomassie Brilliant Blue 염색 용액으로 실온에서 4~6시간 동안 염색합니다. 탈색: 염색된 젤을 탈색 용액에 넣고 단백질 밴드가 명확하게 보일 때까지 여러 번 탈색합니다. 결과 관찰: 탈색 후 젤을 촬영하여 저장할 수 있습니다. 탈색 단계가 완료된 후 사진 촬영을 위해 젤을 이미지 처리 시스템 아래에 놓고 결과를 플로피 디스크에 저장합니다.